Bordetella pertussis, ДНК [ПЦР] [ХЕЛИКС]

Выявление возбудителя коклюша (Bordetella pertussis), в ходе которого с помощью метода полимеразной цепной реакции определяется генетический материал (ДНК) микроорганизма в биоматериале. В случае обнаружения в анализируемом образце возбудителя рода Bordetella с концентрацией возбудителя ниже предела чувствительности тест-системы установить его видовую идентификацию невозможно. Для подтверждения диагноза "коклюшная инфекция", кроме прямых методов выявления возбудителя – определения ДНК возбудителя коклюша методом ПЦР и бактериологического исследования, – может быть рекомендовано определение в крови антител (IgА, IgM и IgG) к Bordetella pertussis.

Услуги по взятию (сбору) биоматериала

Мазок из носоглотки
Мазок из зева (ротоглотки)

Срок выполнения

2 суток

Синонимы русские

Возбудитель коклюша

Синонимы английские

B. Pertussis, DNA

Метод исследования

Полимеразная цепная реакция (ПЦР).

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Мазок из носоглотки, носоглоточный аспират, мазок из зева (ротоглотки).

Как правильно подготовиться к исследованию?

Не принимать пищу в течение 2-3 часов до анализа, можно пить чистую негазированную воду.

Общая информация об исследовании

В России в последние несколько лет отмечается рост заболеваемости коклюшем.

Bordetella pertussis (B. pertussis) – это грамотрицательная аэробная коккобацилла, являющаяся возбудителем коклюша. Инфекция передается воздушно-капельным путем. Риск заболеть наиболее высок у не вакцинированных АКДС детей и беременных женщин. Следует отметить, что прививка АКДС не обеспечивает стопроцентную защиту от заражения, так как иммунный ответ постепенно угасает в течение 1-3 лет после вакцинации. В этой связи подростки и взрослые, вакцинированные более чем 3 года назад и находившиеся в тесном контакте с больным коклюшом или носителем B. pertussis, также подвергаются риску заражения.

В клинической практике применяют несколько лабораторных тестов для диагностики коклюша: посев на питательную среду, метод прямой иммунофлюоресценции (ПИФ), серологические методы и исследование с помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР). ПЦР – метод молекулярной диагностики, позволяющий выявлять в биологическом материале (например, в носоглоточном аспирате) фрагменты генетического материала (ДНК) возбудителя инфекции и наиболее точно и быстро диагностировать коклюш.

Специфичность ПЦР достигает 100 %, что обусловлено использованием в реакции специфичной именно для B. pertussis пары праймеров. Положительный результат у пациента с признаками поражения респираторного тракта позволяет подтвердить диагноз «коклюш» и исключить наличие других бактериальных (в том числе паракоклюша) и вирусных заболеваний.

Исследование с помощью ПЦР характеризуется высокой чувствительностью, превосходящей чувствительность бактериологического метода, ПИФ и реакции непрямой гемагглютинации (РНГА). Следует, однако, заметить, что она зависит от клинической стадии заболевания, в которую был взят биоматериал, от возраста пациента и предшествующего лечения.

В течении коклюша можно выделить 4 стадии: инкубационный период, катаральную, пароксизмальную стадию и стадию выздоровления. ПЦР является предпочтительным методом идентификации возбудителя при подозрении на коклюш в катаральную и раннюю пароксизмальную стадию (около 4 недель после появления первых симптомов). В этот период чувствительность ПЦР максимальна и превосходит чувствительность бактериологического метода. По прошествии более 3-4 недель чувствительность ПЦР несколько снижается. Это имеет особое значение при диагностике заболевания у взрослых пациентов, которые, как правило, игнорируют первые симптомы болезни, характерные для катаральной стадии, и обращаются за помощью в более поздние сроки, в пароксизмальную стадию. При диагностике коклюша в позднюю пароксизмальную стадию и при выздоровлении наиболее точные результаты будут получены при комбинации серологических исследований (например, РНГА) и исследования с помощью ПЦР.

Также ПЦР оптимальна для диагностики коклюша у младенцев, хотя у детей старшего возраста, а также подростков и взрослых она характеризуется большим числом ложноотрицательных результатов. Так, ее чувствительность при взятии биоматериала в первые 10 дней болезни в возрастных группах до 1 года, 1-4 года и старше 5 лет составила 70, 50 и 10 % (для сравнения: чувствительность «золотого стандарта» диагностики коклюша – посева на питательную среду в этот период не превышает 60 %). В качестве биоматериала для диагностики коклюша у младенцев предпочтителен носоглоточный аспират. У детей старшего возраста, подростков и взрослых берут мазки из носоглотки и зева. Использование тампона из кальция альгината в этом случае не рекомендуется.

В отличие от других лабораторных методов, точность ПЦР в меньшей степени зависит от приема антибактериальных препаратов. Так, чувствительность метода при взятии биоматериала на 4-й день лечения эритромицином составила 89 % (бактериологического посева – 56 %), на 7-й день – 56 % (посева – 0). Поэтому ПЦР чаще выбирают для выявления B. pertussis у пациентов в катаральной стадии заболевания, если биоматериал сдается на фоне начатого лечения. Результаты теста при сдаче биоматериала на фоне лечения в пароксизмальную стадию во многих случаях ложноотрицательные.

Исследование с помощью ПЦР с успехом применяется у вакцинированных АКДС пациентов. Следует, однако, отметить, что идентификация B. pertussis в мазках этой группы может означать транзиторное носительство, но не активную инфекцию. Поэтому результаты ПЦР рекомендуется оценивать с помощью дополнительных эпидемиологических, клинических и лабораторных данных.

Для чего используется исследование?

Для диагностики коклюша, особенно у младенцев в период катаральной и ранней пароксизмальной стадии заболевания.

Когда назначается исследование?

При симптомах коклюша в катаральной стадии: лихорадка, насморк, заложенность носа, слезотечение.
При симптомах коклюша в пароксизмальной стадии: приступы интенсивного кашля, сопровождающиеся глубоким свистящим вдохом, рвотой, цианозом кожи лица.
При обследовании пациента, находившегося в тесном контакте с больным коклюшем.

Что означают результаты?

Референсные значения: отрицательно.

Причины положительного результата:

коклюш;
транзиторное носительство.

Причины отрицательного результата:

отсутствие коклюша;
неправильное взятие биоматериала на исследование;
ложноотрицательные результаты чаще наблюдаются при сдаче биоматериала в позднюю пароксизмальную стадию и стадию реконвалесценции, на фоне лечения антибиотиками, у подростков и взрослых пациентов.

Что может влиять на результат?

Стадия заболевания – наиболее точный результат будет получен при сдаче анализа в первые 3-4 недели после начала заболевания.
Возраст пациента – наиболее точный результат будет получен при обследовании пациентов в возрасте до 1 года.
Применение эритромицина и других антибиотиков может приводить к ложноотрицательным результатам.

Важные замечания

Анализ не предназначен для оценки эффективности лечения.
Результат исследования следует оценивать с помощью дополнительных эпидемиологических, клинических и лабораторных данных.

Также рекомендуется

Кто назначает исследование?

Инфекционист, педиатр, пульмонолог, врач общей практики.

Тип биоматериала и способы взятия

Тип	На дому	В Центре	Самостоятельно
Мазок из зева (ротоглотки)	да	да
Мазок из носоглотки			да
Носоглоточный аспират	да	да

На дому: возможно взятие биоматериала сотрудником мобильной службы.

В Диагностическом центре: взятие, либо самостоятельный сбор биоматериала осуществляется в Диагностическом центре.

Самостоятельно: сбор биоматериала осуществляется самим пациентом (моча, кал, мокрота и т.п.). Другой вариант – образцы биоматериала предоставляет пациенту врач (например, операционный материал, ликвор, биоптаты и т.п.). После получения образцов пациент может как самостоятельно доставить их в Диагностический центр, так и вызвать мобильную службу на дом для передачи их в лабораторию.

Литература

Laboratory manual for the diagnosis of whooping cough caused by Bordetella pertussis / Bordetella parapertussis. World Health Organization. Dept. of Immunization, Vaccines and Biologicals. WHO/IVB/04.14, 2004.
Müller FM, Hoppe JE, Wirsing von König CH. Laboratory diagnosis of pertussis: state of the art in 1997. J Clin Microbiol. 1997 Oct;35(10):2435-43.
Riffelmann M, Wirsing von König CH, Caro V, Guiso N; Pertussis PCR Consesus Group. Nucleic Acid amplification tests for diagnosis of Bordetella infections. J Clin Microbiol. 2005 Oct;43(10):4925-9.
Lind-Brandberg L, Welinder-Olsson C, Lagergård T, Taranger J, Trollfors B, Zackrisson G. Evaluation of PCR for diagnosis of Bordetella pertussis and Bordetella parapertussis infections. J Clin Microbiol. 1998 Mar;36(3):679-83.
Dalby T, Krogfelt KA. Laboratory diagnosis of pertussis: agglutination is not suitable. Respirology. 2011 Nov;16(8):1160-2.